染色原理

抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phosphatase，TRAP) 是破骨細(xì)胞的特異性標(biāo)志酶，酒石酸鹽抵抗的酸性磷酸酶在酒石酸環(huán)境中,水解荼酚磷酸鹽,產(chǎn)生的 a-蔡酚與重氮副品紅偶聯(lián)形成不溶性的紫紅色沉淀。骨組織中的破骨細(xì)胞分泌酒石酸鹽抵抗的酸性磷酸酶,用此方法可顯示骨組織中破骨細(xì)胞的活性.此方法適用于骨組織的石蠟切片,冰凍切片及培養(yǎng)的破骨細(xì)胞。

染色步驟

1.37℃預(yù)熱足夠的去離子水，F(xiàn)ixation solution(固定液)室溫放置，細(xì)胞爬片浸沒(méi)30秒，用去離子水徹底清洗，不要讓爬片太干燥；

2.PBS洗一次，吸棄時(shí)注意易將細(xì)胞吸掉；

3.準(zhǔn)備兩個(gè)1.5mLep管，各加Fastgarnet GBCBasesolution(快速石榴石型堿溶液)和Sodium Nitrite Solution(亞硝酸鹽溶液)，輕輕沉勻30秒，室溫靜置2分鐘。兩者混合后為步驟三混勻的溶液；

4.另標(biāo)簽一個(gè)管為A(B)，并按以下要求配置混合液:(個(gè)人意見:明書的B不用做只是對(duì)照)混勻的溶液Naphthol AS-BI Phosphate Solution（蔡酚AS-BI 磷酸溶液) Acelate Solution (酷酸鹽溶液)37℃預(yù)熱的去離子水 Tartrate Solution《酒石酸鹽溶液)(個(gè)人意見:最后加活石酸鹽溶液避光)；

5.把步4中的配置的染色液倒入合適的染色缸中(個(gè)人意見:直接在35mm 皿上放置可拆卸96微孔板染，然后避光(錫箱紙包裹后放置于一次性手套)水浴)，水浴加熱到37℃，再加玻片前一定要保證溫度達(dá)到 37℃；

6.把爬片放入染色缸中，37℃避光孵育1小時(shí)；

7.孵育1小時(shí)后，用去離子水徹底清洗爬片；

8.在HematoxylinGll NO.3(蘇木精洛液)復(fù)染2分鐘；

9.堿性自來(lái)水沖洗兒分鐘，直到出現(xiàn)藍(lán)色的核；

10.自然晾干，甘油明膠封片，顯微鏡觀察。

染色結(jié)果

破骨細(xì)胞細(xì)胞漿呈紫紅色胞核藍(lán)色。

注意事項(xiàng)

骨組織易脫片，操作過(guò)程水洗要輕。

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