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TTC 染色即 2,3,5 - 氯化三苯基四氮唑染色,以下是關于它的詳細介紹:
基本原理:TTC 是一種脂溶性光敏感復合物,無色且可溶于水?;罴毎€粒體內的琥珀酸脫氫酶等脫氫酶可將 TTC 還原,生成紅色不溶性的三苯甲臜。正常組織中的脫氫酶活性正常,與 TTC 反應后呈紅色;而缺血、壞死組織內脫氫酶活性下降或喪失,不能與 TTC 反應,組織不會產生顏色變化,仍呈蒼白,從而可通過顏色變化區(qū)分正常組織和受損組織。
染色步驟:
取材:以腦缺血損傷研究為例,可麻醉動物后直接取腦或經生理鹽水灌注后取腦,取腦時要保持大腦的完整性。
速凍:將取出的腦組織放入 - 20℃冰箱中速凍 20 分鐘左右,便于后續(xù)切片。
切片:一般切成 5-6 片,每隔 2mm 切一片。第一刀在腦前極與視交叉連線中點處,第二刀在視交叉部位,第三刀在漏斗柄部位,第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。如果需計算面積,應切得均勻或用專門的腦槽。
染色:將切片置于濃度為 1%-2% 的 TTC 溶液中,用錫箔紙蓋住,放入 37℃溫箱 15-30min,并不時翻動腦片,使均勻接觸到染色液。也可以將腦片放入多孔板,再滴入 TTC,覆以圓形蓋玻片使均勻染色。
觀察與分析:染色完成后,可肉眼或在顯微鏡下觀察,紅色區(qū)域為存活組織,白色區(qū)域為壞死組織。還可使用圖像分析軟件如 ImageJ 計算壞死區(qū)域占比,進行定量分析。
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